Le Ni Focurose FF (TED) est une méthode de purification qui utilise l'interaction entre le Ni2+ et certains acides aminés (principalement l'histidine, la cystéine et le tryptophane) sur les chaînes latérales des protéines pour la séparation et la purification. Elle convient à la purification des protéines marquées par His et d'autres biomolécules qui interagissent avec le Ni2+. La forte propriété chélatrice du Ni2+ permet une application directe dans la purification des protéines His-tagged exprimées dans les systèmes de sécrétion eucaryotes, tolérant des niveaux plus élevés d'agents réducteurs et de chélateurs sans qu'il soit nécessaire de prétraiter l'échantillon. La résine peut être facilement nettoyée et régénérée sans décapage du nickel, ce qui permet un nettoyage direct au NaOH.
Caractéristiques
Rapide et simple (purification en une étape)
Tolère des niveaux plus élevés d'agents réducteurs et de chélateurs, ce qui permet l'application directe de protéines marquées par His exprimées dans des systèmes de sécrétion eucaryotes sans prétraitement, maximisant ainsi la préservation de l'activité de la protéine.
Ne nécessite pas de décapage au nickel, ce qui permet un nettoyage direct au NaOH, raccourcissant ainsi considérablement le cycle de nettoyage.
Lixiviation du nickel plus faible que pour le Ni Focurose FF (IDA) et le Ni FocuroseFF (IMAC) traditionnels, ce qui élimine la nécessité d'une régénération répétée.
Paramètres de performance
Agarose 6 % hautement réticulé
Taille des particules
45-165µm
Taille moyenne des particules (D50)
90±5µm
Capacité de liaison
≥10 mg (protéine étiquetée His)/mL (résine)
stabilité du pH
3-12 (long terme) 2-14 (court terme)
Stabilité chimique
0.01M HCl, 0.01M NaOH (une semaine)
eDTA 20mM, DTT 10mM, NaOH 1M, urée 8M, guanidine HCl 6M (24 heures)
eDTA 100mM, imidazole 0,5M (2 heures) isopropanol 30% (20 minutes)
Vitesse d'écoulement linéaire (0,3 MPa)
≥300 cm/h
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