Mycoplasma : Également connu sous le nom de mycoplasme, l'organisme procaryote le plus petit et le plus simple jamais découvert, on estime que 15 à 35 % des cellules sont contaminées par des mycoplasmes. La contamination par mycoplasme peut avoir de nombreux effets sur les cellules, notamment sur les propriétés métaboliques, immunitaires ou biochimiques, l'état de croissance et la survie des cellules, ce qui affecte la stabilité, la fiabilité et la précision des résultats expérimentaux ; mycoplasme est difficile à détecter, et Il est difficile à éliminer, il peut facilement passer le filtre standard de 0,22μm, et il peut également antagoniser la plupart des antibiotiques, causant d'énormes pertes à la culture cellulaire. Par conséquent, les cellules doivent être testées régulièrement (par exemple tous les 2 à 3 mois) pour détecter toute contamination par mycoplasme. Il existe un certain nombre de méthodes pour détecter les mycoplasmes, notamment la culture en bouillon ou en gélose, la coloration fluorescente directe ou indirecte, l'ELISA, la PCR directe ou indirecte, etc.
Pour garantir l'exactitude des résultats de la PCR, pour empêcher l'amplification non spécifique de la PCR et la contamination, les mesures courantes consistent à utiliser l'enzyme Taq à démarrage à chaud et l'UDG (uracile-ADN glycosylase).
Le centre actif de l'enzyme Taq modifiée chimiquement est bloqué de telle sorte que l'enzyme n'est pas active à basse température ou à température normale, de sorte qu'une amplification non spécifique due à un mauvais appariement des amorces n'est pas générée avant le chargement pour l'amplification par PCR. À haute température (95 °C, par exemple), les groupes chimiquement modifiés s'hydrolysent et libèrent toutes les activités enzymatiques, ce qui permet d'obtenir un démarrage à chaud de l'enzyme Taq. Minimiser l'amplification non spécifique et la formation de dimères d'amorces, et augmenter la sensibilité et la spécificité de l'amplification.
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