Kit de réactifs en solution NZYGigaprep

solution tamponpour transcription in vitroEscherichia coli

Le kit NZYGigaprep permet la préparation rapide d'ADN plasmidique hautement pur à grande échelle à partir de souches d'E. coli. Détails du kit Le kit NZYGigaprep est conçu pour la préparation rapide et à grande échelle d'ADN plasmidique hautement pur. Le kit a été optimisé pour obtenir typiquement 2 à 10 milligrammes d'ADN à partir de plasmides à nombre de copies élevé ou 500 microgrammes à 2 milligrammes d'acide nucléique à partir de plasmides à faible nombre de copies, tous provenant de souches recombinantes d'Escherichia coli. Notre kit rationalise le processus grâce à une procédure de lyse alcaline/SDS modifiée. Cette procédure prépare le culot cellulaire bactérien à la purification des plasmides. Elle implique la dénaturation de l'ADN chromosomique et plasmidique dans des conditions alcalines. Ensuite, l'introduction d'acétate de potassium déclenche la formation d'un précipité qui contient de l'ADN chromosomique et d'autres composants cellulaires. Simultanément, le tampon d'acétate de potassium neutralise le lysat, ce qui permet à l'ADN plasmidique de revenir à son état super enroulé natif et de rester en solution. Après équilibrage de la colonne avec le tampon d'équilibrage, l'ADN plasmidique se lie sélectivement à la résine échangeuse d'anions. Après un lavage complet de la colonne, l'ADN plasmidique est efficacement purifié et prêt pour l'élution. Une simple étape de précipitation permet de collecter l'ADN élué, qui peut ensuite être facilement dissous dans un tampon TE pour une utilisation ultérieure. L'ADN purifié convient parfaitement aux applications de biologie moléculaire les plus exigeantes, notamment la transfection, la transcription in vitro, le séquençage fluorescent automatisé ou manuel, le clonage, la PCR et l'hybridation. Pour isoler l'ADN de plasmides à faible nombre de copies, de BACs ou de cosmides, doubler les volumes des tampons M1, M2 et M3