Kit de réactifs pour l'amplification de l'ADN Ampli1 WGA PLUS

ADN polyméraseTaq polyméraseNGS

Le kit Ampli1 WGA PLUS a été développé et optimisé pour une amplification équilibrée et complète du contenu total en ADN d'une seule cellule humaine. L'ADN d'entrée (d'une seule cellule et jusqu'à 1000 cellules dans ~1 μI de PBS) peut être dérivé de cellules fraîches/vivantes et/ou fixées (tubes PFA2%, CellSave, CellRescue). Le kit peut également être utilisé pour amplifier jusqu'à 10 ng d'ADN génomique (par exemple à partir d'échantillons de tissus ou FFPE). Après la lyse cellulaire, l'ADN est digéré avec une enzyme de restriction et des adaptateurs sont ligaturés sur les fragments d'ADN. Cela garantit que, pour tout locus donné du génome, les allèles correspondants sont amplifiés sous forme de fragments génomiques de même longueur et de teneur en GC presque identique, ce qui réduit considérablement l'abandon d'allèles dû à la différence d'efficacité d'amplification des molécules d'ADN d'origine. L'amplification, réalisée dans le même tube, est médiée par une seule amorce PCR universelle hautement spécifique pour tous les fragments et utilise une ADN polymérase avec une activité de relecture d'exonucléase 3'→5', avec une fidélité 6,5 fois supérieure à celle de l'ADN polymérase Taq standard. Le résultat du protocole Ampli1 WGA est une bibliothèque bien équilibrée de fragments d'environ 0,2-2 kb représentant l'ensemble du génome. De nombreux types de procédures d'analyse en aval sont compatibles avec le produit Ampli1 WGA PLUS, tels que la détection de variants par Sanger ou par séquençage de nouvelle génération (NGS), l'analyse de génotypes microsatellites ou d'autres analyses de génotypage basées sur la PCR, la CGH en métaphase, la CGH en réseau et l'analyse du nombre de copies à l'échelle du génome par NGS. Deux kits dédiés en aval, Ampli1 OncoSeek Panel et Ampli1 LowPass Kit pour Illumina,