Ouvre la voie à l'analyse fonctionnelle d'une question de recherche spécifique.
Utilisation prévue
Ce kit FluoroSpot Path est destiné au dénombrement des cellules B sécrétant des IgG humaines en réponse au SARS-CoV-2 (RBD) à l'aide du test FluoroSpot. Les cellules B sécrétant des IgG indépendamment de la spécificité de l'antigène (IgG totales) peuvent également être dénombrées. Réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans les procédures de diagnostic.
Pour les cellules B mémoires, nous recommandons une pré-stimulation avec le R848 et l'IL-2 humain recombinant (tous deux inclus).
Performance
Des PBMC humains provenant d'un individu convalescent COVID-19 ont été incubés en présence et en l'absence de R848+IL-2 (stimule les cellules B mémoires) dans des tubes pendant trois jours. Les cellules ont ensuite été lavées abondamment et ajoutées à une plaque FluoroSpot (200 000 cellules/puits) recouverte d'AcM anti-IgG humains. Les spots spécifiques de RBD ont été détectés avec RBD-WASP, c'est-à-dire la protéine recombinante du domaine de liaison au récepteur avec une étiquette WASP, suivie par l'anti-WASP-640. Les spots ont été analysés avec Mabtech IRIS.
Description de l'analyte
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L'immunoglobuline G (IgG) est l'isotype d'Ig le plus abondant dans le sérum, représentant environ 80 % de toutes les immunoglobulines sériques. Chez l'homme, il existe quatre sous-classes d'immunoglobuline G, les concentrations sériques les plus élevées étant celles de l'IgG1, suivie de l'IgG2, de l'IgG3 et de l'IgG4. Chez la souris, les sous-classes d'IgG sont définies comme IgG1, IgG2a/c, IgG2b et IgG3. La molécule d'IgG se compose de deux chaînes lourdes et de deux chaînes légères (κ ou λ), ce qui donne une molécule à deux bras pour la fixation de l'antigène. Des niveaux élevés d'anticorps IgG sont induits à la suite de la réponse initiale IgM dans une réponse immunitaire typique aux antigènes.
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