Ouvre la voie à l'analyse fonctionnelle d'une question de recherche spécifique.
Utilisation prévue
Ce kit FluoroSpot Path est destiné au dénombrement des cellules B sécrétant des IgG humaines en réponse au SARS-CoV-2 (Spike et RBD) à l'aide du test FluoroSpot. Les cellules B sécrétant des IgG indépendamment de la spécificité de l'antigène (IgG totales) peuvent également être dénombrées. Réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans les procédures de diagnostic.
Pour les cellules B mémoires, nous recommandons une pré-stimulation avec le R848 et l'IL-2 humain recombinant (tous deux inclus).
Performance
Des PBMC humains provenant d'un individu convalescent COVID-19 ont été incubés avec R848+IL-2 (stimule les cellules B mémoires) dans des tubes pendant trois jours. Les cellules ont ensuite été lavées abondamment et ajoutées à une plaque FluoroSpot (250 000 cellules/puits) recouverte d'AcM anti-IgG humaines. Les spots IgG spécifiques de Spike ont été détectés avec Spike-GAL, c'est-à-dire la protéine recombinante de Spike avec une étiquette peptidique GAL, suivie par l'anti-GAL-490. Les taches spécifiques au RBD ont été détectées avec RBD-WASP, c'est-à-dire la protéine recombinante Receptor Binding Domain avec une étiquette peptidique WASP, suivie de l'anti-WASP-640. Les spots ont été analysés avec Mabtech IRIS.
Description de l'analyte -
L'immunoglobuline G (IgG) est l'isotype d'Ig le plus abondant dans le sérum, représentant environ 80 % de toutes les immunoglobulines sériques. Chez l'homme, il existe quatre sous-classes d'immunoglobuline G, les concentrations sériques les plus élevées étant celles de l'IgG1, suivie de l'IgG2, de l'IgG3 et de l'IgG4. Chez la souris, les sous-classes d'IgG sont définies comme IgG1, IgG2a/c, IgG2b et IgG3. La molécule d'IgG se compose de deux chaînes lourdes et de deux chaînes légères (κ ou λ), ce qui donne une molécule avec deux bras pour la liaison à l'antigène.
---