Cette procédure est basée sur une méthode enzymatique améliorée, conçue à l'origine pour évaluer la créatinine dans le sérum et l'urine. Le test est réalisé en deux étapes. Dans la première étape, la créatine est éliminée pendant les premières minutes de la phase de préincubation de l'échantillon avec la créatinase. Dans la seconde étape, l'ajout de créatininase, qui agit également en tant que starter de la réaction, hydrolyse la créatinine de l'échantillon en présence de sarcosine oxydase (Sar OD) avec production de peroxyde d'hydrogène.
Créatinine + H2O Créatine
Sarcosine + H2O + O2 H2O2 + Glicine + HCHO
Le peroxyde d'hydrogène produit par la réaction de l'oxydase est quantifié par une réaction de type Trinder dans laquelle le dérivé chromogène HTIB et la 4-amino-antipyrine (4-AA) sont condensés en présence de peroxydase (POD) pour former un colorant quinonéimine rouge.
4-AA + HTIB Quinonéimine rouge + H2O
La vitesse de développement de la couleur est proportionnelle à la concentration de créatinine dans l'échantillon.
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