Le kit RT-PCR en temps réel virellaSARS-CoV-2 mutant est un test permettant la différenciation simultanée des nouvelles lignées de coronavirus (SARS-CoV-2) B.1.1.7 (Royaume-Uni, UK), B.1.351 (Afrique du Sud, ZA) et P.1 (Brasilia, BRA) à partir d'échantillons biologiques.
2 Principe du test
Le kit RT-PCR en temps réel virellaSARS-CoV-2 mutant contient quatre systèmes d'amorces et de sondes spécifiques pour la détection des mutations de la protéine spike du SARS-CoV-2. Chaque mutation est liée à un colorant spécifique. Si l'une des mutations est présente, le canal spécifique n'émettra aucun signal ou un signal retardé. Les mutations couvertes par ce test sont del69/70 (FAM), del 241-243 (ROX), N501Y (HEX) et H655Y (Cy5). Dans le cas de B.1.1.7 (UK), B.1.351 (ZA) ou P.1 (BRA), le canal HEX et un canal supplémentaire, en fonction de la mutation, n'émettront aucun signal ou un signal retardé (tableau 7). Dans ce cas, les deux autres canaux doivent présenter un signal normal.
4 Matériel et réactifs à fournir par l'utilisateur
- Microtubes stériles
- Pipettes (volume réglable)
- Embouts de pipette stériles avec filtre
- Centrifugeuse de table
- Vortexeur
- Instrument de PCR en temps réel
- Tubes de réaction PCR optiques avec couvercle ou plaque de réaction PCR optique avec film optique
- En option : Système de manipulation des liquides pour l'automatisation
7 Matériel d'échantillonnage
Le matériel de départ pour le kit RT-PCR en temps réel virellaSARS-CoV-2 mutant est l'ARN qualifié de SARS-CoV-2 positif par RT-PCR en temps réel. Les éluats dont le nombre de copies est très faible et dont les valeurs CT sont > 32 ne conviennent pas pour être testés avec le kit RT-PCR en temps réel virellaSARS-CoV-2 mutant.
8 Préparation des échantillons
L'ARN élué doit être dilué au 1/10 dans le tampon de dilution afin d'optimiser les conditions pour la détection de la mutation.
---