Kit d'analyse pour la recherche LS-K268

totale en protéinesd'ATPd'AMP

La protéine kinase activée par l'AMP-5 (AMPK) est un capteur clé de l'équilibre énergétique intracellulaire. L'AMPK est activée en réponse à une augmentation du rapport AMP/ATP qui peut être causée par un certain nombre de facteurs tels que la contraction musculaire, la famine ou l'hypoxie. L'AMPK est un complexe protéique hétérotrimérique composé des sous-unités Alpha (63 kDa), Bêta (38 kDa) et Gamma (38 kDa). Pour chaque sous-unité, des isoformes ont été identifiées (alpha-1, alpha-2, bêta-1, bêta-2, gamma-1, gamma-2, gamma-3) qui permettent théoriquement la formation de 12 protéines différentes. La sous-unité alpha contient un domaine sérine/thréonine kinase et les sous-unités régulatrices contiennent des sites de liaison pour l'AMP et l'ATP et pour le glycogène. L'AMPK est activée par phosphorylation sur Thr-172 dans le domaine catalytique. La liaison de l'AMP entraîne une augmentation de 2 à 5 fois de l'activité de l'AMPK par rapport au niveau basal. La liaison de l'AMP à la sous-unité Alpha entraîne une activation allostérique de la kinase et induit un changement de conformation du domaine kinase qui protège l'AMPK de la déphosphorylation de Thr-172. Ce test ELISA cellulaire mesure l'AMPK phosphorylée dans des cellules entières et normalise le signal par rapport à la teneur en protéines totales. L'anticorps reconnaît les deux sous-unités alpha et peut donc être utilisé pour les cellules de tous les tissus (humain, souris, rat). Ce test simple et efficace ne nécessite pas la préparation de lysats cellulaires et peut être utilisé pour étudier la régulation de l'AMPK dans le cadre d'essais à court et à long terme. Dans ce test, les cellules cultivées dans des plaques à 96 puits sont fixées et perméabilisées dans les puits. La phosphorylation de l'AMPK (pAMPK) est mesurée à l'aide d'un ELISA fluorescent suivi d'une mesure de la protéine totale dans chaque puits.