L'enzyme UDG thermogénique (uracil-ADN glycosylase) est criblée, extraite et purifiée à partir de bactéries cultivées en laboratoire et, comme l'UNG d'E. coli, elle hydrolyse les liaisons uracil-glycoside dans l'ADN simple ou double brin, excise l'uracile et produit des sites non basiques sensibles aux alcalins dans l'ADN. Ces sites sans base peuvent être hydrolysés par une endonucléase d'acide nucléique, par chauffage ou par traitement alcalin et, contrairement à l'UNG d'E. coli, l'enzyme présente une faible stabilité thermique, ce qui est donc plus susceptible de l'inactiver. Selon le mode de préparation de l'ADN, les enzymes UDG peuvent être utilisées pour réaliser un clivage de l'ADN-U spécifique à un site commun ou à un brin.
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d'uracile-ADN glycosylase nécessaire pour dégrader complètement 1 μg d'uracile-ADN simple brin purifié (M13) en 60 minutes à 37°C.【Product Features】
Les sites U-ADN sur l'ADN simple et double brin peuvent être hydrolysés, les liaisons glycosides de l'uracile peuvent être excisées et des sites sans base sensibles aux alcalins peuvent être produits dans l'ADN.
♦ Elle est active pour l'ADN simple et double brin.
♦ Inactive pour l'ARN et l'ADN naturellement dépourvus d'uracile.
♦ Il n'y a pas d'exigences pour les ions métalliques et ils sont pleinement actifs en présence d'EDTA. Cependant, l'activité résiduelle dans les systèmes dépassant 100mM K+ ou Na+ est d'environ 70% de l'activité d'origine et une utilisation accrue est nécessaire.
la température optimale de réaction est de 37°C, mais l'activité est meilleure dans une large gamme de 20-50°C, et 95°C peut être complètement inactivé en 2 minutes.
la quantité recommandée pour la PCR est de 0,2U-1U/25μl, et la quantité recommandée pour la RT-qPCR en une étape et à 55-65°C n'est pas supérieure à 0,2U/25 μl,
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