L'inverse Transcriptase (droite) de Dongsheng M-MLV est un M-MLV génétiquement modifié droite. Il diffère du M-MLV droite par sa structure et propriétés catalytiques. L'enzyme possède une activité ARN-dépendante et ADN-dépendante de polymérase et une activité de la ribonucléase H spécifique à l'ARN dans des hybrides de RNA-DNA. L'inverse Transcriptase de Dongsheng M-MLV a l'activité sensiblement inférieure de la RNase H que le transcriptase inverse aviaire du virus de Myeloblastosis (AMV).
Source
Cellules d'E.coli avec un fragment copié du gène de pôle codant le transcriptase inverse de virus murin de leucémie de Moloney.
Applications
Génération de premier cDNA de brin pour l'usage dedans :
- l'ACP, voient le protocole pour la synthèse de cDNA de Premier-brin ;
- ACP en temps réel ;
- deuxième synthèse de cDNA de brin ;
Étiquetage d'ADN ;
Analyse de l'ARN par extension d'amorce.
Contrôle de qualité
L'absence des endodeoxyribonucleases, des exodeoxyribonucleases, des phosphatases et des ribonucléases confirmée par les essais appropriés de qualité.
Fonctionellement examiné dans la première synthèse de cDNA de brin.
Tampon de magasin
Tris-HCL de 20m M (pH 7,5)
200 millimètres de NaCl
EDTA de 0,1 millimètres
1 millimètre DTT
0,01% NP-40
glycérol de 50%
tampon 5xFirst-Strand
Tris-HCL de 250 millimètres (pH 8,3 à 25°C)
375 millimètres de KCl
15 millimètres de mgcl2
50 millimètres DTT