Le dosage immunologique CBIACTH est un lumELISA (Chemiluninescence Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) à deux sites pour la mesure de la chaîne biologiquement active de 39 acides aminés de l'ACTH. Un anticorps polyclonal de chèvre contre l'ACTH, purifié par chromatographie d'affinité, et un anticorps monoclonal de souris contre l'ACTH sont spécifiques de régions bien définies de la molécule d'ACTH. Un anticorps est préparé pour se lier uniquement à l'ACTH 34-39 C-terminal et cet anticorps est biotinylé. L'autre anticorps est préparé pour se lier uniquement à la région médiane et à l'ACTH N-terminale 1-24 et cet anticorps est marqué à la peroxydase de raifort [HRP] pour la détection. Dans ce test, les calibrateurs, les contrôles ou les échantillons sont incubés simultanément avec l'anticorps marqué par une enzyme et un anticorps couplé à la biotine dans un puits de microplaque recouvert de streptavidine. À la fin de l'incubation du test, le micropuits est lavé pour éliminer les composants non liés. Après l'ajout du substrat luminol, l'activité enzymatique dans la fraction liée à l'enzyme est directement proportionnelle à la concentration d'ACTH dans l'échantillon. Une courbe standard est préparée mettant en relation les unités de lumière (RLU) et la concentration d'ACTH. Les concentrations d'ACTH présentes dans les contrôles et les échantillons sont déterminées directement à partir de cette courbe.
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