Nouveau fragment d'anticorps qui se lie aux protéines de fusion GFP
Analyser les protéines de fusion GFP - dans un tube
Les protéines de fusion fluorescentes sont des outils populaires pour étudier la localisation des protéines et la dynamique cellulaire. Ces constructions fusionnent généralement la totalité - ou au moins un domaine fonctionnel - d'une protéine cible avec l'un des nombreux types de protéines fluorescentes rapporteuses. Celles qui proviennent à l'origine de la méduse A. victoria sont appelées protéines fluorescentes vertes ou GFP. Il est facile d'obtenir des images de cellules en utilisant une protéine de fusion GFP, mais pour obtenir une image complète, ces données d'imagerie sont souvent combinées avec des informations biochimiques supplémentaires pour la protéine (ou le domaine protéique) d'intérêt. Pour ces expériences biochimiques, une deuxième protéine de fusion est généralement conçue en utilisant un domaine "tag" différent qui permet la purification. Ces analyses in vitro supplémentaires peuvent être utilisées pour confirmer la fonctionnalité de la construction de fusion "étiquetée", ainsi que pour extraire les complexes multiprotéiques qui peuvent se former dans le milieu cellulaire. Le manque de réactifs spécifiques, fiables et efficaces a limité l'utilisation de la GFP et des protéines de fusion fluorescentes apparentées, tant pour les études de biologie cellulaire que pour les analyses biochimiques directes.
Les GFP-Traps utilisent des fragments d'anticorps alpaga de très haute affinité couplés à des billes d'agarose ou à des billes d'agarose magnétiques. Ces "pièges à nanobodies" sont parfaits pour les expériences d'immunoprécipitation, d'immunopurification et d'immunopulldown avec une pureté (et un rendement) jusqu'à 10 fois supérieurs à ceux des anticorps monoclonaux de souris conventionnels. Compatibles avec une grande variété de matériaux sources, les Nanobody-Traps peuvent être utilisés avec des cellules de mammifères, des tissus et des organes, des bactéries, des levures et même des plantes.
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