Réactif RNzol LS
----Kit d'extraction de l'ARN total des échantillons de sang/de liquide (Spin-column)
Description
Le réactif RNzol LS est un réactif prêt à l'emploi pour l'isolement de l'ARN total à partir d'échantillons de sang entier et d'autres liquides. Le réactif, une solution monophasique de phénol et de guanidine est l'othiocyanate, est une amélioration de la méthode d'isolation de l'ARN en une seule étape développée par Chomczynski et Sacchi. Pendant l'homogénéisation ou la lyse de l'échantillon, le réactif RNzol LS maintient l'intégrité de l'ARN, tout en perturbant les cellules et en dissolvant les composants cellulaires. L'ajout de chloroforme suivi d'une centrifugation permet de séparer la solution en une phase aqueuse et une phase organique. L'ARN reste exclusivement dans la phase aqueuse. Après le transfert de la phase aqueuse, l'ARN est récupéré par précipitation avec de l'alcool isopropylique. Après l'élimination de la phase aqueuse, l'ADN et les protéines de l'échantillon peuvent être récupérés par précipitation séquentielle.
L'ARN total isolé par le réactif RNzol LS est exempt de toute contamination par les protéines et l'ADN. Il peut être utilisé pour l'analyse par Northern blot, l'hybridation par dot blot, la sélection poly(A)+, la traduction in vitro, le test de protection des RNases et le clonage moléculaire. Pour l'utilisation dans l'amplification en chaîne par polymérase (PCR), il est recommandé de traiter l'ARN isolé avec de la DNase I de grade d'amplification lorsque les deux amorces se trouvent à l'intérieur d'un seul exon.
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