Réactif ADN polymérase Titan HotTaq

pour la recherchepour PCR

L'ADN polymérase Titan HotTaq (Fig. 1) est une ADN polymérase Titan Taq modifiée. À température ambiante, elle est inactive et n'a pas d'activité polymérase. L'ADN polymérase Titan HotTaq est activée par une incubation de 15 minutes à 95-97°C, ce qui empêche l'extension des amorces recuites de manière non spécifique et des amorce-dimères formées à basse température pendant la préparation de la PCR. L'enzyme a une activité de remplacement de l'exonucléase 5' à 3' dépendante de la polymérisation, mais n'a pas d'activité exonucléasique 3' à 5'. L'enzyme possède une "activité extendase" permettant le clonage TA. Concentration : 5 unités/µl Définition de l'unité : Une unité est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour catalyser l'incorporation de 10 nmol de dNTP dans une forme insoluble dans l'acide en 30 minutes à 74°C. Origine : Purifiée à partir d'un E. coli : Purifiée à partir d'une souche d'E. coli portant un plasmide surproducteur contenant un gène modifié de l'ADN polymérase de Thermus aquaticus. Contrôle de qualité : L'enzyme est exempte d'activités d'amorçage, d'exonucléases et d'endonucléases non spécifiques. SDS/PAGE - bande de 95 kD, >98 % de pureté. L'activité et la stabilité sont testées par thermocycle. Le taux d'erreur par nucléotide et par cycle est d'environ 2,5 x 10-5 ; la précision est d'environ 4 x 104. La demi-vie estimée à 95°C est de 1,5 heure. Stockage et tampon de dilution : 50% glycérol (v/v), 20 mM Tris-HCl pH 8.7 à 25°C, 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA et stabilisateurs. Fourni avec : 10x Tampon de Réaction 1 (Mg2+, sans détergent) Tris-HCl et (NH4)2SO4 10x Tampon de réaction 2 (sans Mg2+) Tris-HCl, (NH4)2SO4 et détergent 25 mM MgCl2 enhancer 10x - Additif qui facilite l'amplification de modèles difficiles (par exemple, modèles d'ADN riches en GC).