Kit de réactifs transcriptase inverse RScript™

colorantpour synthèse d'ADNc

Ce kit est développé sur la base de la transcriptase inverse RScript II, qui utilise une amorce de transcription inverse avec une structure en tige-boucle se liant à l'extrémité 3' de la molécule de miRNA. Sous l'action de la transcriptase inverse RScript II, l'ADNc premier brin du miARN artificiellement allongé est obtenu. La séquence générale recommandée pour les boucles souches est 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGGTATTCGCACTGGATACGAC-3' ; d'autres séquences de boucles souches peuvent également être sélectionnées en fonction des besoins expérimentaux. En règle générale, les amorces de transcription inverse n'ont besoin que d'ajouter 6 bases complémentaires inverses à l'extrémité 3' du miARN à la séquence de la boucle souche. Cette méthode est hautement spécifique et n'effectue la transcription inverse que sur les miARN matures, sans être interférée par ses précurseurs. Les miARN ayant des séquences hautement homologues peuvent être distingués avec précision. Les produits de transcription inverse obtenus avec ce produit peuvent être directement utilisés pour une détection quantitative ultérieure par des méthodes de colorants ou de sondes. Test de sensibilité du RK004-0050 Le RK004-0050 a été testé avec différentes concentrations (1000 ng, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng, 0,01 ng) d'ARN de cellules Hela comme matrice, ciblant le gène has-mir16-5p. Les courbes d'amplification ont montré une sensibilité aussi faible que 10 pg d'ARN total Performance d'amplification du RK004-0050 sur des modèles provenant de différentes sources (A) ARN de cellules Hela (B) ARN de souris Le RK004-0050 a été utilisé avec différentes concentrations (1000 ng, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng) d'ARN de cellules Hela et d'ARN de souris comme modèles. Les courbes d'amplification pour différents miARN ont montré d'excellentes performances pour Human-U6, has-mir16-5p, has-mir221-3p, Mouse-U6, mmu-mir-5p, mmu-mir24-3p, entre autres.