Pour la détermination quantitative de la transferrine dans le sérum humain .
Principe :
Les anticorps antitransferrine, lorsqu'ils sont mélangés à des échantillons contenant de la transferrine, forment des complexes insolubles. Ces complexes provoquent un changement d'absorbance, dépendant de la concentration en transferrine de l'échantillon du patient, qui peut être quantifié par comparaison avec un calibrateur de concentration en transferrine connue.
RÉACTIFS
R1 (DILUENT) : Tampon Tris 20 mmol/L, PEG 8000, pH 8,3
R2 (ANTICORPS) : Sérum de chèvre, transfert anti-humain pH 7,5. Azide de sodium 0,95 g/L
CALIBRAGE (optionnel) Il est recommandé d'utiliser un calibrateur de protéines sériques.
PRÉPARATION DES RÉACTIFS
Les réactifs sont prêts à l'emploi.
PROCÉDURE
Longueur d'onde : 340 nm (320-360 nm)
Température de travail : 37°C
Trajet optique : 1 cm
Type d'essai : Turbidimétrie
Direction : croissante
1. Amener les réactifs et le photomètre (porte-cuvette) à 37°C .
2. Ajuster l'instrument à zéro avec de l'eau distillée.
3. Introduire à la pipette dans un tube à essai
4. Mélanger et lire l'absorbance (Abs.1) après l'ajout de l'échantillon ou du calibrateur.
5. Pipeter dans un tube à essai
6. Bien mélanger et lire l'absorbance (Abs.2) des calibrateurs et de l'échantillon exactement 2 minutes après l'ajout de R2 .
CALCUL
Calculer la différence d'absorbance (Abs.2-Abs.1) de chaque point de la courbe d'étalonnage et reporter les valeurs obtenues en fonction de la concentration de transferrine de chaque dilution de calibrateur. La concentration de transferrine dans l'échantillon est calculée par interpolation de son (Abs.2Abs.1) dans la courbe d'étalonnage.
CONTRÔLE DE LA QUALITÉ
Le contrôle des protéines sériques est recommandé pour surveiller les performances des procédures de dosage manuelles et automatisées.
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